Tuotteet

DNA-emästen oksidatiiviset vauriot johtavat yleensä hapettuneiden puriinien, erityisesti 7,8-dihydro-8-oksoguaniinin (8-oksoG) ja 7,8-dihydro-8-oksoadeniinin (8-oksoA) muodostumiseen, joista ensimmäinen on tunnettu mutageeninen vaurio.Koska 8-oksoG on helposti alttiina lisähapetukselle verrattuna normaaleihin emäksiin, emäksen insertiota DNA-synteesin aikana 8-oksoG:n hapettunutta muotoa vastapäätä tutkittiin in vitro.Synteettistä templaattia, joka sisälsi yhden 8-oksoG-leesion, käsiteltiin ensin erilaisilla yhden elektronin hapettimilla tai singlettihappiolosuhteissa ja sitten sille suoritettiin alukepidennys, jota katalysoi Klenow-fragmentin ekso- (Kf exo-), vasikan kateenkorvan DNA-polymeraasi alfa (pol-alfa). ) tai ihmisen DNA-polymeraasi beeta (pol beeta).Aiempien raporttien mukaisesti dAMP ja dCMP liitetään selektiivisesti 8-oksoG:tä vastapäätä kaikkien kolmen DNA-polymeraasin kanssa.Mielenkiintoista on, että 8-oksoG:n hapettumisen havaittiin indusoivan dAMP- ja dGMP-insertiota vauriota vastapäätä Kf-ekso-:n vaikutuksesta alukkeen pidentymisen ohimenevällä estymisellä, joka tapahtui modifioidun emäksen kohdassa.Lisäksi leesio muodostaa lohkon pol-alfan ja pol-beetan DNA-synteesin aikana.Kokeet 8-oksoA-modifioidulla templaattioligonukleotidilla osoittavat, että sekä 8-oksoA että 8-oksoA:n hapetettu muoto liittävät suoraan dTMP:n Kf exo-.8-oksoG:tä sisältävien oligonukleotidien massaspektrometrinen analyysi ennen hapetusta IrCl62:lla ja sen jälkeen on yhdenmukainen ensisijaisesti 8-oksoG-kohdan hapettumisen kanssa, mikä johtaa guanidinohydantoiiniosan muodostumiseen päätuotteeksi.Ei saatu todisteita emäksisten kohtien muodostumisesta.Nämä tulokset osoittavat, että 8-oksoG:n hapettunut muoto, mahdollisesti guanidinohydantoiini, voi ohjata dNTP:iden väärinlukemista ja väärinsyöttöä DNA-synteesin aikana.Jos tällainen prosessi tapahtuisi in vivo, se edustaisi pistemutageenista vauriota, joka johtaisi G-->T- ja G-->C-transversioihin.Kuitenkin 8-oksoA:n vastaava hapettunut muoto osoittaa ensisijaisesti T:n oikean insertion DNA-synteesin aikana Kf-ekso-.