Tuotteet

y-glutamyylitranspeptidaasit (y-GT:t) katkaisevat glutationin y-glutamyyliamidisidoksen ja siirtävät vapautuneen y-glutamyyliryhmän veteen (hydrolyysi) tai vastaanottajaaminohappoihin (transpeptidaatio).Näillä kaikkialla esiintyvillä entsyymeillä on keskeinen rooli glutationin biosynteesissä ja hajoamisessa sekä ksenobioottisessa myrkkyjen poistamisessa.Tässä raportoimme Bacillus licheniformis γ-GT:n (BlGT) ja sen l-Glu:n kompleksin 3Å-resoluutiokiderakenteen.Röntgenrakenteet vahvistavat, että BlGT kuuluu N-terminaaliseen nukleofiiliseen hydrolaasi-superperheeseen ja paljastavat, että proteiinissa on avoimen aktiivisen kohdan rako, joka on samanlainen kuin Bacillus subtilis -bakteerin homologiselle entsyymille raportoitu, mutta erilainen kuin ihmisen y-GT:n ja muista mikro-organismeista peräisin oleville y-GT:ille.Tiedot viittaavat siihen, että l-Glu:n sitoutuminen indusoi BlGT:n suuren alayksikön C-terminaalisen hännän uudelleenjärjestämisen ja mahdollistaa sellaisten happotähteiden klusterin tunnistamisen, jotka mahdollisesti osallistuvat metalli-ionin tunnistamiseen.Näiden tähteiden roolia BlGT:n konformaatiostabiliteettiin on tutkittu karakterisoimalla neljän uuden Ala-yksittäisen mutantin automaattista prosessointia, entsymaattista aktiivisuutta, kemiallista ja lämpödenaturaatiota.Tulokset osoittavat, että Asp568:n korvaaminen Ala:lla vaikuttaa sekä proteiinin automaattiseen prosessointiin että rakenteelliseen stabiilisuuteen.