Tuotteet

Tumaproteiinin Lamin-A mutanttimuodon, nimeltään Progerin (PG) tai Lamin AA50, kertymistä esiintyy Hutchinson-Gilford Progeria Syndromessa (HGPS) tai Progeriassa, joka on nopeutunut ikääntyminen.Yksi tämän geneettisen häiriön pääoireista on ihonalaisen rasvan väheneminen dramaattisen lipodystrofian vuoksi. Indusoimme vakaasti ihmisen PG:n ja GFP:n (Green Fluorescent Protein) ekspression kontrollina 3T3L1-soluissa käyttämällä lentivirusjärjestelmää tutkiaksemme PG-ekspression vaikutus tämän solulinjan erilaistumiskykyyn, joka on yksi eniten käytetyistä adipogeenisista malleista.Kvantitatiivinen proteomiikka (iTRAQ) tehtiin PG:n kertymisen vaikutuksen tutkimiseksi.Useat moduloiduista proteiineista validoitiin immunoblottauksella ja reaaliaikaisella PCR:llä.Mitokondrioiden toiminta analysoitiin mittaamalla a) mitokondrioiden perusaktiivisuutta, b) superoksidianionin tuotantoa ja c) hengitysketjun eri kompleksien yksilöllistä tehokkuutta. Havaitsimme, että lentiviruksen geenin kuljetuksen aiheuttama PG:n yli-ilmentyminen johtaa proliferaationopeuden lasku ja puutteet adipogeenisessa kapasiteetissa verrattuna kontrolliin.Kvantitatiivinen proteomiikka-analyysi osoitti 181 proteiinia merkittävästi (p<0,05) moduloituneena PG:tä ilmentävissä preadiposyyteissä.Mitokondrioiden toiminta on heikentynyt PG:tä ilmentävissä soluissa.Erityisesti olemme havainneet kompleksin I aktiivisuuden lisääntymisen ja superoksidianionin ylituotannon.Inkubointi reaktiivisten happilajien (ROS) poistaja-aineilla vähentää autofagista proteolyysiä, kuten LC3-II/LC3-I-suhde paljasti. PG:n ilmentyminen 3T3L1-soluissa edistää muutoksia useissa biologisissa prosesseissa, mukaan lukien sytoskeleton rakenne, lipidiaineenvaihdunta, kalsium. mitokondrioiden säätely, translaatio, proteiinien laskostuminen ja energiantuotanto.Tietomme vahvistavat ROS:n kertymisen vaikutusta ennenaikaiseen ikääntymiseen liittyvään fenotyyppiin ja muodostavat yhteyden mitokondrioiden toimintahäiriön ja proteostaasin menetyksen välillä HGPS:ssä.