Tuotteet

Orbitaalisten fibroblastien erilaistuminen kypsiksi rasvasoluiksi ja sitä seuraava rasvakudoksen kertyminen on osoitettu Gravesin orbitopatian (GO) etenemisessä.Autofagia osallistuu adipogeneesiin, mutta autofagian roolista GO:n alkamisessa ja etenemisessä tiedetään vähän.Tämän tutkimuksen tavoitteena on tutkia autofagian roolia GO:n patogeneesissä. Analysoitiin GO-potilaiden ja normaaleiden koehenkilöiden orbitaalisia rasva-/sidekudoseksplantteja sekä eristettyjä silmäkuopan fibroblasteja.Adipogeneesi indusoitiin käyttämällä erilaistumisväliainetta vetyperoksidin kanssa tai ilman, ja autofagiaa manipuloitiin käyttämällä bafilomysiini A1:tä ja Atg5-kohdennettua lyhyttä hiusneula-RNA:ta (shRNA).Autofagosomit tunnistettiin elektronimikroskopialla.Autofagiaan liittyvien geenien ilmentyminen ja adipogeneesiin liittyvät transkriptiotekijät analysoitiin reaaliaikaisella käänteistranskriptiopolymeraasiketjureaktiolla ja/tai Western blot -analyysillä.Lipidipisaroiden kertymistä tutkittiin Oil Red O -värjäyksellä. Autofagisia vakuoleja oli enemmän GO-soluissa kuin ei-GO-soluissa (p<0,05).Autofagiaan liittyvien geenien ilmentyminen oli merkittävästi korkeampi GO-kudoksissa ja -soluissa kuin vastaavasti niiden ei-GO-vastineissa.Interleukiini-1β lisäsi LC3-II-, p62- ja Atg7-proteiinia GO-soluissa.Autofagosomien kertymistä osoitettiin adipogeneesin päivänä 4 ja se väheni 10. päivään mennessä lipidipisaroiden muodostumisen ohella.LC3- ja p62-proteiinien ilmentyminen lisääntyi 48 tunnin sisällä erilaistumisen jälkeen ja väheni vähitellen päivästä 4 päivään 10. Bafilomysiini A1 -käsittely ja Atg5-käsittely shRNA:n vaikutuksesta estivät lipidipisaroiden kertymistä ja adipogeenisten markkerien ilmentymistä. Autofagia lisääntyi GO-kudoksessa ja -soluissa verrattuna ei-GO-kudos ja -solut, mikä viittaa siihen, että autofagialla on rooli GO-patogeneesissä.Autofagian manipulointi voi olla GO:n terapeuttinen kohde.