Tuotteet

Kolisiinin E1-kanavadomeenin kalvotopologiaa tutkittiin fluoresenssiresonanssienergiansiirrolla (FRET).FRET sisälsi geneettisesti koodatun fluoresoivan aminohapon (kumariinin) luovuttajana ja selektiivisesti leimatun kysteiinitähteen, joka oli kytketty DABMI:n (4-(dimetyyliamino)fenyyliatsofenyyli-4'-maleimidi) kanssa FRET-akseptorina.Fluoresoiva kumariinitähde liitettiin proteiiniin ortogonaalisen tRNA/aminoasyyli-tRNA-syntetaasiparin kautta, joka mahdollisti selektiivisen liittämisen mihin tahansa kohtaan kolisiinikanavadomeenin sisällä.Jokaisessa variantissa oli stop (TAG) mutaatio kumariinin liittymistä varten ja kysteiini (TGT) mutaatio DABMI-kiinnitystä varten.Kuusi kierteiden välistä etäisyyttä helikseissä 1-6 määritettiin käyttämällä FRET-analyysiä sekä liukoisille että kalvoon sitoutuneille tiloille.FRET-tiedot osoittivat suuria muutoksia heliksien 3-6 välisissä heliksien välisissä etäisyyksissä, kun kalvoliitos tarjosi uutta tietoa kanavadomeenin kalvoon sitoutuneesta rakenteesta.Yleensä kumariini-DABMI FRET -kierteiden väliset tehot laskivat kalvon sitoutuessa, mikä perustui kolisiinikanavan sateenvarjomalliin.Alustava malli kanavaalueen suljetulle tilalle kehitettiin nykyisten ja aiemmin julkaistujen FRET-tietojen perusteella.Malli ehdottaa kierteiden 1-7 pyöreää järjestelyä myötäpäivään solunulkoiselta puolelta ja heliksien 1, 6, 7 ja 10 kalvorajapintojen yhdistämistä kierteiden 8 ja 9 muodostaman keskeisen transmembraanisen hiusneulan ympärille.