Tuotteet

5-fluorourasiilin (5-FU) ja kahden endogeenisen monofosfaattinukleotidin useiden metaboliittien kvantifioimiseksi kehitimme alkuperäisen menetelmän, joka perustuu nestekromatografia-tandem-massaspektrometriaan (LC-MS/MS).Tämä määritys mahdollisti: (i) 5-fluori-2'-deoksiuridiini-5'-monofosfaatin (5-FdUMP) solunsisäisen tuotannon 5-FU:sta tai 5-fluori-2'-deoksiuridiinista (5-FdUrd) , (ii) 5-FdUMP-pitoisuuden vaikutus solunsisäiseen 2'-deoksiuridiini-5'-monofosfaatti (dUMP)/tymidiini-5'-monofosfaatti (TMP) -suhteeseen ja (iii) 5-FdUMP:n ja 5-FU ihmisen viljellyistä soluista ABC-kuljettajilla.Meidän koeolosuhteissamme soluja inkuboitiin 5-FU:n tai 5-FUrd:n kanssa.Sitten soluproteiinit saostettiin metanolilla.Tämä menettely tuotti suuren uutton saannon.Lisäksi 5-FU- ja 5-FdUMP-erityksen mittaamiseksi soluista suoritimme näiden molekyylien kvantifioinnin elatusaineessa.Elatusaineet joko injektoitiin suoraan (5-FU) tai tehtiin kiinteäfaasiuutto käyttäen Oasis Wax -uuttopatruunaa (5-FdUMP).Analyyttien erotus suoritettiin dC18 Atlantis 3,5 µm, (100 mm × 2,1 mm id) -kolonnilla isokraattisella tavalla käyttäen ammoniumformiaattipuskuri/metanoli/vesi (5/5/90, v/v) liikkuvana faasina.Ajoaika ei ylittänyt 6,2 minuuttia.Analyytit ionisoitiin sähkösumutusrajapinnassa negatiivisen ionin tilassa.Validoimme menetelmän alueella 2,5–150 ng ml -1 yhdisteiden mukaan.Testien sisäinen ja välinen vaihtelu oli alle 10 % seitsemän päivän aikana.Kaikki yhdisteet olivat stabiileja soluissa tai elatusaineessa, kun näytteitä säilytettiin -20 °C:ssa vähintään kaksi viikkoa ja kolmen jäädytys-sulatussyklin jälkeen.Matriisivaikutusta ei havaittu kummassakaan väliaineessa.