Tuotteet

Fluoreseiinin ja fluoreseiinimetyyliesterin monogalaktopyranosidit: synteesi, entsymaattinen hydrolyysi biotnyloidulla β-galaktosidaasilla ja translaatiodiffuusiokertoimen määritys

Fluoreseiinimonoglykosideja (d-galaktopyranosidi (FMG) ja d-glukopyranosidi) ja niiden metyyliesteriä (MFMG) on valmistettu asetobromoglukoosi/galaktoosista ja fluoreseiinimetyyliesteristä hyvillä saannoilla.Galaktojohdannaisille on suoritettu entsymaattisia hydrolyysikokeita (käyttämällä biotinyloitua β-galaktosidaasia) ja laskettu kineettiset parametrit.Hydrolyysin aikana on havaittu 15–20-kertainen fluoresenssin intensiteetin kasvu.Lineaarinen fluoresenssin lisääntyminen on havaittu lyhyellä aikavälillä ja alhaisella substraattipitoisuudella, mikä tekee näistä yhdisteistä käyttökelpoisia ja herkkiä koettimia galaktosidaaseille.MFMG:n Michaelis-Menten-vakion (Km) arvon suuruus on suurempi kuin FMG:n, mikä viittaa mahdolliseen fluorogeenisen substraatin konformaatiomuutokseen.Km-arvo biotinyloidulle β-Gal:lle FMG:llä on pienempi kuin natiivientsyymin.Tämä havainto osoittaa biotinyloidun entsyymin korkeamman substraattiaffiniteetin verrattuna alkuperäiseen entsyymiin.Translaatiodiffuusiokertoimet on mitattu sekä fluorogeenisille substraateille että molemmille tuotteille käyttäen fluoresenssikorrelaatiospektroskopiaa.Fluorogeenisten substraattien ja entsymaattisten hydrolyysituotteiden translaatiodiffuusiokertoimien on mitattu olevan samanlaisia, välillä 3,5-4,5 × 10-10 m2 s-1.Siten substraatin ja tuotteen translaatioliikkuvuuden erosta johtuva entsymaattisen kinetiikan vahvistuminen tai hidastuminen ei ole niin ilmeistä.