Tuotteet

1.Metaboliitin profilointimenetelmät ovat tärkeitä työkaluja metaboliittipoolien mittaamiseen biologisissa järjestelmissä.Vaikka useimmat metaboliittien profilointimenetelmät raportoivat suhteellisia intensiteettejä tai riippuvat muutamasta sisäisestä standardista, jotka edustavat kaikkia metaboliitteja, biologisten solujen ja nesteiden metaboliittipoolin kvantitatiivisen kuvauksen perimmäinen vaatimus on absoluuttisen pitoisuuden määrittäminen.Raportoimme tässä korkean suorituskyvyn ja herkän kaasukromatografian/tandemmassaspektrometrian (GC/MS/MS) kohdennetun metaboliitin profilointimenetelmän, joka mahdollistaa kaikkien havaittujen metaboliittien absoluuttisen kvantifioinnin.Menetelmä perustuu metyylikloroformiaatin derivatisointiin ja kvantifiointiin lisäämällä näytteitä metaboliittistandardeilla, jotka on erikseen derivatisoitu deuteroiduilla derivatisointireagensseilla.Perinteinen elektroniiskuionisaatio korvataan positiivisella kemiallisella ionisaatiolla, koska jälkimmäinen säilyttää paljon suuremmassa määrin molekyyli-ionin ja muut suuren molekyylipainon fragmentit.Tämä teki helpommaksi valita ainutlaatuisia MS/MS-siirtymiä monien yhdessä eluoituvien metaboliittien joukosta.Tällä hetkellä uusi GC/MS/MS-menetelmä käsittää 67 yleistä primaarista metaboliittia, joista suurin osa kuuluu orgaanisten amino- ja ei-aminohappojen ryhmiin.Näytämme menetelmän soveltuvuuden virtsa- ja seeruminäytteisiin.Menetelmä on merkittävä parannus nykyiseen menetelmään aminohappojen ja ei-amino-orgaanisten happojen kvantitatiiviseen GC/MS-metaboliitin profilointiin.

2,24S-hydroksikolesteroli (24OHC) ja 27-hydroksikolesteroli (27OHC) ovat kaksi rakenteellisesti samanlaista oksisterolia, jotka ovat peräisin eri alkuperältä - edellinen muodostuu lähes yksinomaan aivoissa ja jälkimmäinen muodostuu vähemmässä määrin aivoissa kuin useimmissa muissa elimissä.TESTAAVA HYPOTEESI: Hermoston vaurio ja/tai demyelinaatio lisää 24OHC:n virtausta aivoista aivo-selkäydinnesteeseen (CSF), kun taas viallinen veri-aivoeste lisää 27OHC:n virtausta verenkierrosta aivo-selkäydinnesteeseen. Isotooppilaimennusmassa spektrometriaa käytettiin kahden oksisterolin määrittämiseen aivo-selkäydinnesteessä ja plasmassa yli 250 potilaalta, joilla oli erilaisia ​​neurologisia ja geriatrisia sairauksia. Eri sairaudet vaikuttivat näiden kahden oksisterolin CSF-tasoihin paljon enemmän kuin plasman tasoihin.Potilailla, joilla oli aktiivisia demyelinisoivia sairauksia, oli kohonnut 24OHC-pitoisuus aivo-selkäydinnesteessä ja suhteellisen korkea 24OHC/27OHC-suhde.Potilailla, joilla oli aivokalvontulehdus, molempien steroidien määrä oli yleensä korkea ja 24OHC/27OHC-suhde alhainen.Alzheimerin tautia sairastavilla potilailla aivo-selkäydinnesteessä oli hieman kohonnut 24OHC-arvo ja vähemmän 27OHC:n nousu.Multippeliskleroosia sairastavilla potilailla oli taipumus saada korkeampi 24OHC-taso aktiivisina aikoina, kun 24OHC/27OHC-suhde oli korkea. Kahden oksisterolin mittaukset aivo-selkäydinnesteessä ja plasmassa voivat lisätä merkittävästi olemassa olevia biokemiallisia menetelmiä neurologisten sairauksien arvioimiseksi.