Tuotteet

Samoin kuin muut positiivisen juosteen RNA-virukset, tombusvirukset replikoituvat kalvoon sitoutuneen virusreplikaasikompleksin (VRC) avulla.VRC koostuu p92-viruksen koodaamasta RNA-riippuvaisesta RNA-polymeraasista (RdRp), viruksen p33-RNA-chaperonista ja useista kooptoiduista isäntäproteiineista.Jotta p92-replikaatioproteiinista tulisi toiminnallinen RdRp sen translaation jälkeen, se tulisi sisällyttää VRC:hen ja sen jälkeen aktivoida.Olemme aiemmin osoittaneet soluttomassa hiivauutteeseen perustuvassa määrityksessä, että Tomato bushy stunt -viruksen (TBSV) RdRp:n aktivointi vaatii liukoisen isäntätekijän.Tässä artikkelissa tunnistamme solun lämpöshokkiproteiinin 70:n (Hsp70) kooptoiduksi isäntätekijäksi, joka tarvitaan N-terminaalisesti typistetyn rekombinantin TBSV RdRp:n aktivoimiseen.Lisäksi pienimolekyylinen Hsp70-toiminnan esto estää tombusviruksen RdRp:n RNA-synteesiä in vitro.Lisäksi osoitamme, että neutraalit fosfolipidit, nimittäin fosfatidyylietanoliamiini (PE) ja fosfatidyylikoliini (PC), tehostavat RdRp-aktivaatiota in vitro.Sitä vastoin fosfatidyyliglyserolilla (PG) on voimakas ja hallitseva inhiboiva vaikutus RdRp-aktivaatioon in vitro.Osoitamme myös, että PE ja PC stimuloivat RdRp-viruksen plus-juoste-RNA:n [(+)RNA] -vuorovaikutusta, kun taas PG estää viruksen RNA:n sitoutumista RdRp:hen.Erilaisten fosfolipidien stimuloivan ja estävän roolin perusteella tombusviruksen RdRp-aktivaatiossa ehdotamme, että tombusvirukset voisivat hyödyntää kohdennettujen subsellulaaristen kalvojen lipidikoostumusta säätelemään uutta VRC-kokoonpanoa infektion aikana. Viruksen koodaama RNA-riippuvainen RNA-polymeraasi (RdRp), joka vastaa viruksen RNA-jälkeläisten syntetisoinnista useiden positiivisen juosteen RNA-virusten infektoituneissa soluissa, on aluksi inaktiivinen.Tämä strategia todennäköisesti välttää viruksen RNA-synteesin sytosolissa, mikä johtaisi nopeasti RNA:n laukaisemien solujen antiviraalisten vasteiden induktioon.Kalvoon sitoutuneen replikaasikompleksin kokoamisen aikana viruksen RdRp aktivoituu epätäydellisesti ymmärrettävän prosessin kautta, joka tekee RdRp:stä kykenevän RNA-synteesiin.Käyttämällä TBSV RdRp:tä osoitamme, että yhdessä valittu solun Hsp70 chaperoni ja neutraalit fosfolipidit helpottavat RdRp:n aktivaatiota in vitro.Sitä vastoin fosfatidyyliglyserolilla (PG) on hallitseva estävä vaikutus in vitro RdRp-aktivaatioon ja RdRp-viruksen RNA-vuorovaikutukseen, mikä viittaa siihen, että RdRp:tä ympäröivä kalvomainen mikrodomeeni vaikuttaa suuresti sen kykyyn RNA-synteesiin.Siten viruksen RdRp:n aktivaatio riippuu todennäköisesti useista isäntäkomponenteista infektoituneissa soluissa.