Tuotteet

Beeta-D-2'-deoksi-2'-fluori-2'-C-metyylisytidiini (PSI-6130) on tehokas spesifinen hepatiitti C -viruksen (HCV) RNA-synteesin estäjä Huh-7-replikonisoluissa.HCV NS5B RNA -polymeraasin estämiseksi PSI-6130 on fosforyloitava 5'-trifosfaattimuotoon.PSI-6130:n fosforylaatiota ja HCV NS5B:n estoa tutkittiin.PSI-6130:n fosforylaatio rekombinantilla ihmisen 2'-deoksisytidiinikinaasilla (dCK) ja uridiini-sytidiinikinaasi 1:llä (UCK-1) mitattiin käyttämällä kytkettyä spektrofotometristä reaktiota.PSI-6130:n osoitettiin olevan puhdistetun dCK:n substraatti, jonka Km oli 81 mikroM ja kcat 0,007 s-1, mutta se ei ollut substraatti UCK-1:lle.PSI-6130-monofosfaatti (PSI-6130-MP) fosforyloitui tehokkaasti difosfaatiksi ja sen jälkeen trifosfaatiksi rekombinantilla ihmisen UMP-CMP-kinaasilla ja vastaavasti nukleosididifosfaattikinaasilla.Villityypin ja mutatoituneiden (S282T) HCV NS5B RNA -polymeraasien estoa tutkittiin.PSI-61 30 -trifosfaatin (PSI-6130-TP) vakaan tilan estovakio (Ki) villityypin entsyymillä oli 4,3 mikroM.Samanlaiset tulokset saatiin 2'-C-metyyliadenosiinitrifosfaatilla (Ki = 1,5 mikroM) ja 2'-C-metyylisytidiinitrifosfaatilla (Ki = 1,6 mikroM).PSI-6130-TP inhiboi NS5B:tä, jossa oli S282T-mutaatio, jonka tiedetään aiheuttavan resistenssin 2'-C-metyyliadenosiinille, yhtä tehokkaasti kuin villityyppiä.PSI-6130-MP:n sisällyttäminen RNA:han, jota katalysoi puhdistettu NS5B-RNA-polymeraasi, johti ketjun päättymiseen.