Tuotteet

Yksi tekijöistä, jotka estävät regeneratiivisen lääketieteen kliinistä soveltamista rappeutuviin rustosairauksiin, on sopiva solulähde.Kondrosyytit, ainoa rustosolutyyppi, joita on kasvatettu in vitro viljelyolosuhteissa solujen määrän lisäämiseksi, menettävät fenotyyppinsä sekä kykynsä tuottaa hyaliinista rustokudosta.Tässä tutkimuksessa määritämme, että seerumi- ja kasvutekijätön kolmiulotteinen (3D) viljelyjärjestelmä palauttaa kuljetettujen kondrosyyttien kyvyn muodostaa rustokudosta in vitro, prosessi, johon liittyy sox9. Naudan nivelrustosoluja siirrostettiin kahdesti mahdollistaa solujen määrän lisääntymisen (P2) ja viljellään suurella tiheydellä 3D-kollageeni-II-päällystetyillä kalvoilla korkean glukoosipitoisuuden väliaineessa, jota on täydennetty insuliinilla ja deksametasonilla (SF3D).Solut karakterisoitiin yksikerroksisen laajennuksen ja 3D-viljelyn jälkeen virtaussytometrialla, geeniekspressiolla ja histologialla.Varhaiset muutokset signaalinvälitysreiteissä uudelleenerilaistumisen aikana karakterisoitiin. P2-soluilla oli progenitorimaista antigeeniprofiilia 99 % CD44(+) ja 40 % CD105(+) ja geeniekspressioprofiili, joka viittaa vyöhykkeiden välisiin soluihin.P2 SF3D:ssä ilmensi kondrogeenisia geenejä ja kertynyttä solunulkoista matriisia.Insuliinireseptorin (IR) alasäätely HNMPA-(AM3) tai PI-3/AKT-kinaasireitti (aktivoituu insuliinihoidolla) Wortmanninilla esti kollageenisynteesiä.HNMPA-(AM3) vähensi Col2-, Col11- ja IR-geenien sekä Sox6:n ja -9:n ilmentymistä.HNMPA-(AM3)-käsiteltyjen solujen yhteisimmunosaostus- ja kromatiini-immunosaostusanalyysit osoittivat koaktivaattorien Sox6 ja Med12 sitoutumisen Sox9:ään, mutta vähensivät Sox9-Col2a1:n sitoutumista. Kuvaamme uuden viljelymenetelmän, joka mahdollistaa kondrosyyttien määrän lisäämisen ja edistää hyaliinin kaltainen rustokudoksen muodostuminen osittain insuliinivälitteisen Sox9-Col2a1-sitoutumisen kautta.Tällä lähestymistavalla syntyneen kudoksen soveltuvuus käytettäväksi nivelten korjaamisessa on tutkittava in vivo.