Tuotteet

LecA (PA-IL) on Pseudomonas aeruginosan tuottama sytotoksinen lektiini ja adhesiini, joka sitoo hydrofobisia galaktosideja suurella spesifisyydellä ja affiniteetilla.Käyttämällä lecA-egfp-translaatiofuusiota ja biofilmin ekstrasellulaarisen matriisin immunoblot-analyysiä osoitamme, että lecA ekspressoituu biofilmillä kasvatetuissa soluissa.Sekä polystyreenillä että ruostumattomalla teräksellä tehdyissä staattisissa biofilmimäärityksissä biofilmin syvyys ja pinnan peitto vähentyivät lecA:n mutaation vuoksi ja lisääntyivät LecA:ta ylituottavassa PAO-P47-kannassa.Myös isopropyyli-beeta-D-tiogalaktosidin (IPTG) tai p-nitrofenyyli-alfa-D-galaktosidin läsnä ollessa esti kasvu biofilmin pinnan peittävyyttä kantakannassa PAO-P47, mutta ei teräskuponkien lecA-mutantissa. NPG).Lisäksi kypsät villityypin biofilmit, jotka muodostuivat näiden hydrofobisten galaktosidien puuttuessa, voitaisiin dispergoida lisäämällä IPTG:tä.Sitä vastoin p-nitrofenyyli-alfa-L-fukoosin (NPF), jolla on korkea affiniteetti P. aeruginosa LecB (PA-IIL) -lektiiniin, lisäämisellä ei ollut vaikutusta biofilmin muodostumiseen tai leviämiseen.IPTG:n, NPG:n tai NPF:n läsnäolo ei vaikuttanut P. aeruginosa PAO1:n planktoniseen kasvuun, eikä kanta kyennyt hyödyntämään näitä sokereita hiilen lähteinä, mikä viittaa siihen, että havaitut vaikutukset biofilmin muodostumiseen johtuivat LecA-ligandin kilpailevasta estämisestä. sitova.Samanlaisia ​​tuloksia saatiin myös biofilmeistä, joita kasvatettiin dynaamisissa virtausolosuhteissa teräskuponkien päällä, mikä viittaa siihen, että LecA edistää P. aeruginosan biofilmiarkkitehtuuria erilaisissa ympäristöolosuhteissa.

Arabidopsis-kasvien lehdistä on havaittu alfa-L-fukosidaasi (EC 3.2.1.51), joka pystyy vapauttamaan t-fukosyylitähteen ksyloglukaanioligosakkaridien sivuketjusta.Lisäksi alfa-L-fukosidaasi, jolla oli samanlainen substraattispesifisyys, puhdistettiin kaalin (Brassica oleracea) lehdistä yhden vyöhykkeen tekemiseksi SDS-PAGE:ssa.Tästä proteiinivyöhykkeestä saatiin kaksi peptidisekvenssiä, ja niitä käytettiin tunnistamaan Arabidopsis-geeni, joka koodaa alfa-fukosidaasia, jota ehdotamme kutsuvan nimellä AtFXG1.Lisäksi on löydetty Arabidopsis-geeni, jolla on homologiaa tunnettujen alfa-L-fukosidaasien kanssa, ja ehdotimme sen nimeämistä nimellä AtFUC1.Sekä AtFXG1 että ATFUC1 ilmentyivät heterologisesti Pichia pastoris -soluissa ja alfa-L-fukosidaasiaktiivisuudet erittyivät viljelyalustaan.AtFXG1:n koodaama alfa-L-fukosidaasi oli aktiivinen ksyloglukaanin XXFG:n oligosakkarideja vastaan ​​sekä 2'-fukosyylilaktitolia vastaan, mutta ei p-nitrofenyyli-alfa-L-fukopyranosidia vastaan.Heterologisesti ilmennetty AtFUC1 oli kuitenkin aktiivinen vain 2'-fukosyylilaktitolia vastaan.Siten edellisen täytyy liittyä ksyloglukaanin aineenvaihduntaan.